水浴鍋在DNA片段的純化與回收中的應(yīng)用

1．從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段

(1)柱平衡步驟：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

(2)將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量。

(3)向膠塊中加入等倍體積溶液PC，50℃水浴鍋放置10min，其間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。

(4)將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中），12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。

(5)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。

(6)重復(fù)操作步驟(5)。

(7)將吸附柱CB2放入收集管中，12000rpm離心2min，盡量除去漂洗液。將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，徹底晾干。

(8)將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液EB，室溫放置2min。

(9)12000rpm離心2min，收集DNA溶液。

2．從PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液中回收DNA

(1)柱平衡步驟：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

(2)估計(jì)PCR反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入等倍體積溶液PC，充分混勻。

(3)將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2min，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。

(4)向吸附柱CB2中加入500μl漂洗液PW，12000rpm離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CB2放入收集管中。

(5)重復(fù)操作步驟(4)。

(6)將吸附柱CB2放回收集管中，12000rpm離心2min，盡量除去漂洗液。將吸附柱CB2室溫放置數(shù)分鐘，徹底晾干。

(7)將吸附柱CB2放入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加適量的洗脫緩沖液EB，室溫放置2min。

(8)12000rpm離心2min，收集DNA溶液。